Мультимерный анализ фактора Виллебранда: новые диагностические возможности

Актуальность. Мультимерный анализ (МА) является важнейшим инструментом в диагностике болезни Виллебранда (БВ). Существующие методики МА являются сложными, не стандартизованными, занимают много времени.

Цель исследования — оценить диагностические возможности автоматизированного метода МА фактора фон Виллебранда (vWF).

Материалы и методы. Исследованы образцы плазмы здоровых Добровольцев, а также пациентов с установленным типом БВ и приобретенным синдромом Виллебранда (СВ). Для постановки типа БВ выполнялись следующие лабораторные тесты: антиген vWF; ристоцетин-кофакторная активность vWF; коллаген-связывающая активность vWF; тест ристоцетин-индуцированной агрегации тромбоцитов; активность фактора VIII, фактор VIII-связывающая и коллаген-связывающая способности vWF. МА проводился с использованием набора HYDRAGEL 5 von Willebrand Multimers на автоматическом анализаторе Hydrasys 2. Интерпретация распределения мультимеров vWF в геле проводилась визуально: выявлялись высокомолекулярные, промежуточные и низкомолекулярные формы.

Результаты. У здоровых добровольцев было выявлено 9—12 протомеров с нормальным распределением, аналогичным контролям. У пациентов с 1-м типом БВ наблюдалось относительное уменьшение интенсивности мультимерных полос с сохранением их нормального распределения. У пациентов с 3-м типом БВ отмечалось полное отсутствие мультимерного сигнала на геле. У пациентов с 2А типом отсутствовали высоко- и среднемолекулярные мультимеры; у пациентов с 2М и 2N типами БВ на фоне измененных функциональных свойств vWF распределение мультимеров соответствовало нормальному. У большинства пациентов с СВ не выявлено нарушения распределения мультимеров, однако у части больных наблюдались изменения в виде некоторого снижения больших мультимерных форм в фореграмме.

Выводы. МА позволил визуализировать различные типы БВ, метод удобен в применении и может быть использован для определения подтипа болезни. Однако только полная панель тестов позволит с высокой точностью типировать БВ.

1. Rodeghiero F., Castaman G., Dini E. Epidemiological investigation of the prevalence of von Willebrand's disease. Blood 1987;69:454-9. doi: 10.1182/blood.v69.2.454.454.

2. Nichols W.L., Hultin M.B., James A.H., Manco-Johnson M.J., Montgomery R.R., Ortel T.L., Rick M.E., Sadler J.E., Weinstein M., Yawn B.P. Von Willebrand disease (VWD): evidence-based diagnosis and management guidelines, the National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI) Expert Panel re- port (USA). Haemophilia 2008;14(2):171-232. doi: 10.1111/j.1365-2516.2007.01643.x.

3. Андреева Т.А., Климова Н.И., Тарасова И.С., Лаврухин Д.Б., Чернов В. М. Состояние специализированной помощи детям и взрослым с болезнью Виллебранда в РФ (по данным анкетирования главных гематологов). Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии 2013;12(1):5-12.

4. Leebeek F.W., Eikenboom C.J. Von Willebrand's Disease. N Engl J Med 2016;375(21):2067-80. doi: 10.1056/NEJMra1601561.

5. Yee A., Kretz C.A. Von Willebrand factor: form for function. Semin Thromb Haemost 2014;40(1):17-27. doi: 10.1055/s-0033-1363155.

6. Sadler J.E. A revised classification of von Willebrand disease. For the Subcommittee on von Willebrand Factor of the Scientific and Standardization Committe e of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost 1994;71(4):520-5. PMID: 8052974.

7. Sadler J.E., Budde U., Eikenboom J.C.J., Favaloro E.J., Hill F.G.H., Holmberg L., Ingerslev J., Lee C.A., Lillicrap D., Mannucci P.M., Mazurier C., Meyer D., Nichols W.L., Nishino M., Peake I.R., Rodeghiero F., Schneppenheim R., Ruggeri Z.M., Srivastava A., Montgomery R.R., Federici A.B. Update on the pathophysiology and classification of von Willebrand disease: a report of the Subcommittee on von Willebrand Factor. J Thromb Haemost 2006;4:2103-14. doi: 10.1111/j.1538-7836.2006.02146.x.

8. Ledford-Kraemer M.R. Analysis of von Willebrand factor structure by multimer analysis. Am J Hematol 2010;85(7):510-4. doi: 10.1002/ajh.21739.

9. Oliver S., Edwin K., Lau E., Chapman K., Favaloro E. Laboratory Testing for Von Willebrand Factor Multimers. Methods Mol Biol 2017;1646:495-511. doi: 10.1007/978-1-4939-7196-1_36.

10. Collection, Transport, and Processing of Blood Speciments for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-Fifth Edition, 2008. [Electronic resource]. URL: https://clsi.org/media/1399/h21a5_sample.pdf.

11. Pruthi R.K., Daniels T.M., Heit J.A., Chen D., Owen W.G., Nichols W.L. Plasma von Willebrand factor multimer quantitative analysis by in-gel immunostaining and infrared fluorescent imaging. Thromb Res 2010;126:543-9. doi: 10.1016/j.thromres.2010.09.015.

12. Pikta M., Zemtsovskaja G., Bautista H., Nouadge G., Szanto T., Viigimaa M., Banys V. Preclinical evaluation of a semi-automated and rapid commercial electrophoresis assay for von Willebrand factor multimers. J Clin Lab Anal 2018;32(6):e22416. doi: 10.1002/jcla.22416.

13. Crist R.A., Heikal N.M., Rodgers G.M., Grenache D.G., Smock K.J. Evaluation of a new commercial method for von Willebrand factor multimeric analysis. Int J Lab Hem 2018;40(5):586-91. doi: 10.1111/ijlh.12869.

14. Perez-Rodriguez A., Batlle J., Corrales I., Borras N., Rodriguez-Trillo A., Loures E., Cid A.R., Bonanad S., Cabrera N., Moret A., Parra R., Mingot-Castellano M.E., Navarro N., Altisent C., Perez-Montes R., Marcellini S., Moreto A., Herrero S., Soto I., Mosteirin N.F., Jimenez-Yuste V., Alonso N., de Andres Jacob A., Fontanes E., Campos R., Paloma M.J., Bermejo N., Berrueco R., Mateo J., Arribalzaga K., Marco P., Palomo A., Quismondo N.C., Inigo B., Del Mar Nieto M., Vidal R., Paz Martmez M., Aguinaco R., Tenorio M., Ferreiro M., Garria-Frade J., Rodriguez-Huerta A.M., Cuesta J., Rodriguez-Gonzalez R., Garria-Candel F., Dobon M., Aguilar C., Batlle F., Vidal F., Lopez-Fernandez M.F. Role of multimeric analysis of von Willebrand factor (VWF) in von Willebrand disease (VWD) diagnosis: Lessons from the PCM-EVW-ES Spanish project. PLoS One 2018;13(6):e0197876. doi: 10.1371/journal.pone.0197876.

15. Timm A., Fahrenkrug J., J0rgensen H.L., Sennels H.P., Goetze J.P. Diurnal variation of von Willebrand factor in plasma: the Bispebjerg study of diurnal variations. Eur J Haematol 2014;93(1):48-53. doi: 10.1111/ejh.12298.

16. Bierkaemper S., Trautmann-Grill K., Marten S., Tiebel O., Knoefler R. High variability of laboratory phenotype in genetically proven von Willebrand Disease type 2B. Res Pract Thromb Haemost 2020;4(Suppl 1). ISTH 2020 Virtual Congress.

17. Полетаев А. В., Серегина Е. А., Федорова Д. В., Жарков П. А. Современные возможности дистанционной диагностики болезни Виллебранда у детей, проживающих на территории Российской Федерации. Вопросы гемотологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии 2020;19(3):54-60. doi: 10.24287/1726-1708-2020-19-354-60.

18. Bykowska K., Ceglarek B. Clinical significance of slightly reduced von Willebrand factor activity. Pol Arch Intern Med 2020;130(3):225-31. doi: 10.20452/pamw.15162.

19. Veyradier A., Jenkins C.S., Fressinaud E., Meyer D. Acquired von Willebrand syndrome: from pathophysiology to management. Tromb Haemost 2000;84:175-82. doi: 10.1023/b:thro.0000011369.70824.e6.